一、体外抗菌活性检测实验简介
体外抗菌实验：体外条件下，测定细菌/真菌对测试样品的敏感程度。体外抗菌实验分为抑菌实验和杀菌实验，抑菌实验可测定仅有抑制细菌/真菌生长繁殖而无杀灭作用的测试样品；杀菌实验可测定不仅抑制而且能杀灭细菌/真菌的测试样品。
抑菌实验方法有OD值法、抑菌圈法、共培养+平板涂布计数法（一般培养环境为细菌/真菌培养基）、MIC。
杀菌实验方法有共培养+平板涂布计数法（一般培养环境为PBS/生理盐水溶液）、MBC。
1、抑菌圈测试
1.1实验原理
供试材料含可溶性抗菌成分，此成分在琼脂培养基中可自由扩散，形成一定浓度的含药区域。由于各种微生物对不同材料或同一材料不同浓度的敏感性不同，因而形成不同大小直径的抑菌圈。
1.2参考标准
GBT39101-2020-多肽抗菌性测定 抑菌圈法
NCCLS 药敏试验标准 纸片扩散法
1.3实验流程图
2、 OD值测试
2.1实验原理
细菌悬浮液的浓度在一定范围内与透光度成正比，通过OD值可以定性反映出微生物的浓度或数量。
不同材料按比例与菌液共培养一定时间后，通过比较不同组别（不同材料、不加材料）菌液OD值之间的大小来判断不同材料的抗菌性能。
2.2实验流程图
3、平板涂布计数测试
3.1实验原理
不同材料与菌液共培养一定时间后，不同组别（不同材料、不加材料）的菌液稀释一定倍数后涂布平板，以计算出不同组的菌液浓度。通过与对照组比较，进而计算出实验组菌液浓度下降百分比，即得到材料对测试菌株的抗菌性能。
3.2参考标准
GBT 31402-2015 塑料 塑料表面抗菌性能试验方法
JCT 1054-2007 镀膜抗菌玻璃
GBT 20944.3-2008 纺织品抗菌性能的评价 第3部分震荡法
GBT 21510-2008 纳米无机材料抗菌性能检测方法
GB/T 23763-2009 光催化抗菌材料及制品抗菌性能的评价
3.3实验流程图
4、MIC/MBC测试
4.1实验原理
将样品稀释成不同浓度（二倍稀释法），加入到微孔板/无菌试管中，在每个孔/试管中加入一定浓度的测试菌，培养一定时间后肉眼观察培养液的混浊情况，如果是澄清的，说明没有细菌的增长，即细菌的生长得到了抑制，培养液澄清的最小样品浓度为最小抑菌浓度，即MIC。
然后将澄清孔/管（3个样品浓度）取出涂布于培养基表面，若无细菌生长，则说明测试的菌已经被杀灭，此时的样品浓度为最小杀菌浓度，即MBC。
4.2 参考标准
YY/T 0688.1-2008临床实验室检测和体外诊断系统 感染病原体敏感性试验与抗菌剂敏感性试验设备的性能评价
GB/T27623.1-2011 渔用抗菌药物药效试验技术规范 第1部分:常量肉汤稀释法 药物敏感性试验
4.3实验流程图
1、抑菌圈测试
1.1块体类—薄膜、布料、金属块、纸片、凝胶等
送样量：至少3个/种菌。
制样要求：金属块、凝胶类样本须制备成统一大小的圆形/方形，建议制备直径为6-10 mm圆形。布料、纸片类样本可代为裁剪，默认制备直径为6 mm。
注：凝胶样本须保证样本在培养条件下（一般为37℃）不融化。
1.2液体类
送样量：根据测试时样本浓度而定
①若采用原液测试，则样本量为1 mL/种菌；
②若采用稀释后样本测试，则须告知稀释倍数及稀释液，样本量为1 mL/稀释倍数/种菌。
1.3粉末类
送样量：因不同样本密度不同，无法保证每个加样孔均能加入等量样本，故建议样本做分散液，按照等体积加样(每个孔最大加样量为0.2 mL)，能提升样本量的一致性。需要提供质量/体积比（选择合适的样本分散液），样本量为质量/体积×1 mL/种菌。
如果不可使用分散液，需要预试，样本量可联系本公司人员确认。
2、OD值测试
2.1块体类—薄膜、布料、金属块、纸片、凝胶等
送样量：需要提供样本与菌液的培养体系。比如X g样本/mL菌液，样本量为4X g/种菌。
2.2液体类（要求样本溶液无色或者淡色）
送样量：根据测试时样本的溶剂和浓度而定
①若溶剂具备杀菌性（如DMSO、乙醇、甲醇、DMF等），推荐提供样本浓度为50倍测试浓度，样本量为0.1 mL/种菌。
举例：测试材料的溶剂为DMSO，测试浓度为2 mg/mL。则需提供样本为100 mg/mL浓度的样本0.1 mL/种菌。
②若溶剂不具备杀菌性（如PBS、纯水、生理盐水等），推荐提供样本浓度为10倍测试浓度，样本量为0.4 mL/种菌。
举例：测试材料的溶剂为纯水，测试浓度为2 mg/mL。则需提供样本为20 mg/mL浓度的样本0.4 mL/种菌。
注：如果提供样本原液浓度高于推荐浓度，可按比例计算样本量。
2.3粉末类
送样量：需要提供样本与菌液的培养体系。比如X g样本/mL菌液，样本量为4X g/种菌。
3、平板涂布计数测试
3.1块体类—薄膜、金属块、镀膜玻璃等（具备一定的表面积）
测试方法参考国标GBT 31402-2015 塑料 塑料表面抗菌性能试验方法（https://max.book118.com/html/2017/1123/141231780.shtm）、JCT 1054-2007 镀膜抗菌玻璃（https://www.antpedia.com/standard/5144389-1.html）
送样量：样本量为1个/次重复/种菌
样本尺寸：标准尺寸大小5×5cm，建议最小尺寸1×1cm
3.2液体类
送样量：根据测试时样本的溶剂和浓度而定
①若溶剂具备杀菌性（如DMSO、乙醇、甲醇、DMF等），推荐提供样本浓度为50倍测试浓度，样本量为0.03 mL/次重复/种菌。
举例：测试材料的溶剂为DMSO，测试浓度为2 mg/mL。则需提供样本为100 mg/mL浓度的样本0.03 mL/次重复/种菌。
②若溶剂不具备杀菌性（如PBS、纯水、生理盐水等），推荐提供样本浓度为10倍测试浓度，样本量为0.1 mL/次重复/种菌。
举例：测试材料的溶剂为纯水，测试浓度为2 mg/mL。则需提供样本为20 mg/mL浓度的样本0.1 mL/次重复/种菌。
3.3粉末类
送样量：需要提供样本与菌液的培养体系。比如X g样本/mL菌液，样本量为X g/次重复/种菌。
4、MIC/MBC测试
4.1粉末/液体类（要求样本溶液，完全溶解且无色或者淡色）-微孔板法
送样量：根据测试时样本的溶剂和初始工作浓度而定
①若溶剂具备杀菌性（如DMSO、乙醇、甲醇、DMF等），推荐提供样本浓度为50倍测试浓度，样本量为0.03 mL/种菌。
举例：测试材料的溶剂为DMSO，测试浓度为2 mg/mL。则需提供样本为100 mg/mL浓度的样本0.03 mL/种菌。
②若溶剂不具备杀菌性（如PBS、纯水、生理盐水等），推荐提供样本浓度为10倍测试浓度，样本量为0.1 mL/种菌。
举例：测试材料的溶剂为纯水，测试浓度为2 mg/mL。则需提供样本为20 mg/mL浓度的样本0.1 mL/种菌。
注：如果提供样本原液浓度高于推荐浓度，可按比例计算样本量。
如果样本为粉末，可按照浓度和所需体积计算样本量（＜10 mg者，需称量并标记清楚，避免样本量较少情况下再反复称量造成损耗）。
4.2粉末/液体类（样本颜色较重）-平板法
送样量：根据测试时样本工作浓度和浓度个数而定。比如工作浓度为X g/mL（或µM），测试n个浓度，样本量为60X*n g（或10X µM的液体样本6*n mL）
4.3液体类（样本属于分散液或制备成分散液，且呈无色或者淡色）-试管法
送样量：根据测试时样本工作浓度而定
①若分散剂具备杀菌性（如DMSO、乙醇、甲醇、DMF等），推荐提供样本浓度为50倍测试浓度，样本量为2 mL/种菌。
举例：测试材料的分散剂为DMSO，测试浓度为2 mg/mL。则需提供样本为100 mg/mL浓度的样本2 mL/种菌。
②若分散剂不具备杀菌性（如PBS、纯水、生理盐水等），推荐提供样本浓度为10倍测试浓度，样本量为10 mL/种菌。
举例：测试材料的分散剂为纯水，测试浓度为2 mg/mL。则需提供样本为20 mg/mL浓度的样本10 mL/种菌。
4.5粉末类（直接加样）-试管法
送样量：根据测试时样本的工作浓度而定。比如工作浓度为X mg/mL（g/mL），则样品量为30X mg（g）/种菌。
