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细胞增殖及毒性检测

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预约须知

一、简介: 细胞毒性检测是生物相容性测试的一种,检测药物或者新型材料在生物环境中的毒性情况,即通过检测材料或者药物对细胞的增殖或者生长的影响,来评价药物或材料的毒性或者活性,主要用于药物活性筛选、细胞增殖/毒性测定、抗肿瘤药效计算IC50等;常用MTT法或者CCK8法检测,另外也可以通过Live/dead双染法进行细胞成像,更直观的记录细胞的存活情况。 (一)CCK8测试 1. 实验原理 CCK-8(cell-counting kit-8)检测试剂盒是应用WST-8取代MTT被还原,WST-8是一种类似于MTT的化合物,在电子耦合试剂存在的情况下,可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成橙黄色的formazan。对于同样的细胞,颜色的深浅和细胞数目呈线性关系。应用酶标仪测定吸光值(450nm)并进行统计学计算便可以获得细胞毒性相关数据。 2. 参考标准 GBT16886.5-2017医疗器械生物学评价第5部分:体外细胞毒性试验; ISO 10993-12 2007; 3. 实验流程图

(二)MTT测试

1. 实验原理

哺乳动物胞的线粒体酶可将黄绿色的MTT降解形成蓝紫色的物质,用二甲基亚砜(DMSO)将其溶解成溶液,用酶标仪测定其浓度(570nm),从而定量测定细胞的存活比例。

2. 实验流程图

样品要求

1. 块体类—薄膜、布料、金属块、纸片、凝胶等

(1)送样量:a. 与细胞的作用方式为直接接触的话,至少3个/种细胞/时间点;b.样本处理方式为浸提的话,可参考国标ISO 10993-12 2007中的浸提方式浸提,根据浸提方式按量和检测时间点提供;

(2)制样要求:若是需要把细胞接种到材料上的话,金属块、凝胶类样本须制备成统一大小的圆形/方形,建议制备直径为5-7 mm圆形。布料、纸片类样本可代为裁剪,默认制备直径为6 mm。

2. 液体类

送样量:根据测试时样本浓度和检测时间点而定,按照单次检测需要的3-5倍的量寄送;若采用稀释后样本测试,则须告知稀释倍数及工作液浓度;若溶剂为有机溶剂(如DMSO,醇类,酚类等),最高工作液浓度中,溶剂的占比低于0.5%。

3. 粉末类

送样量:根据测试时样本浓度和检测时间点而定,按照单次检测需要的3-5倍的量寄送;其中:

a. 可溶性粉末:注明溶剂的种类(如无水乙醇,异丙醇,DMSO,培养基,PBS或者生盐水等),当样品对溶剂有特殊需求时,请在送样时附加所需溶剂;

b. 不可溶粉末:注明样本性质,灭菌方式,及分散为均匀悬浮液所需必要步骤,

<如果不可使用分散液,需要预试,样本量可联系本公司人员确认>

注:测试时,默认每组3个平行,每孔培养基加样量100μL。

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